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如何解決PCR實驗室檢測被污染的問題?

所屬分類:常見問題    發布時間: 2021-01-05    作者:天朗科技
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PCR反應的.大特點是具有較大擴增能力與極高的靈敏性,但令人頭痛的問題是易污染,極其微量的污染即可造成假陽性的產生。面對眾多的污染源,比如樣本交叉污染、試劑儀器交叉污染、克隆質粒污染、PCR擴增產物污染、還有極容易忽視的氣溶膠污染,氣溶膠是由固體或液體小質點分散并懸浮在氣體介質中形成的膠體分散體系,在空氣與液體面摩擦時,比如在操作時比較劇烈地搖動反應管,開蓋時、吸樣時及污染進樣槍的反復吸樣都可形成氣溶膠而污染。這樣的污染來的悄無聲息,防不勝防。


 

雖然這些污染對PCR實驗結果的影響已經受到了廣泛重視,多數PCR實驗室對污染控制都采取了各種辦法,比如定期大掃除清理、劃分操作區域、試劑分裝、操作謹慎、重復實驗、多角度驗證結果。但是微量的核酸片段就能被擴增,所以對污染物的控制不僅僅是做到這些就能夠杜絕和避免的,關鍵是需要從源頭控制。目前多數生物試驗室,分子實驗每天都在大規模進行,污染源已經無處不在,特異性的,非特異性的,同源的,非同源的,廣泛分布在樣本容器、實驗室臺面,試劑溶液中、儀器表面內管附著等等。以下就是為了清除這些污染源研究出來的方法:

 

解決PCR實驗室檢測被污染的方法

1、酒精擦拭:將核酸沉淀,擦拭后保證污染表面污染得到一定程度的緩解(簡單、方便、成本低)。

2、修飾:標記遺傳物質,阻止聚合酶與核酸的結合,從而抑制DNA擴散(效果相對較好)。

3、酶解:酶可將長鏈的核酸分子降解成小片段(速度快、效果效果相對相對較好)。

4、高壓變性:高壓可以將核酸降解成20-30bp的小片段(徹底、成本低)。

5、紫外照射:PCR產物中嘧啶堿基會形成二聚體,延伸終止(方便、范圍廣、成本低)。

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